NHEK即正常人表皮角质形成细胞,是从人体表皮组织分离获得的原代细胞,作为体外皮肤模型研究常用的细胞材料。人体表皮最主要的细胞类型就是角质形成细胞,参与皮肤屏障构建、损伤修复、炎症反应等多项生理过程。借助体外培养的NHEK细胞,科研人员可以脱离动物实验,在细胞层面开展皮肤相关课题研究,为皮肤药理、毒理、化妆品安全性评估等方向提供实验基础。
NHEK细胞具备典型的上皮细胞形态,在合适培养条件下可保持原有细胞生物学特征。细胞在增殖过程中会逐步分化,模拟表皮角质形成细胞在体内的生长、角化过程。该细胞对培养环境较为敏感,温度、培养液组分、血清浓度、钙离子浓度都会影响细胞增殖与分化状态,因此培养过程需要严格把控各项环境参数,维持细胞活性,保证实验结果稳定。
1.主要应用领域。化妆品原料的体外刺激性测试,评估原料对表皮细胞的影响;皮肤屏障、皮肤老化、伤口愈合机制相关基础研究;皮肤病发病机理探究,如特应性皮炎、银屑病等表皮相关病症;药物体外筛选,评价外用制剂对皮肤细胞的作用;皮肤组织工程研究,用于人工皮肤模型构建。
2.体外培养方法。细胞复苏时快速融化冻存管,离心去除冻存保护剂后接种于专用培养基,放置在恒温培养箱内培养;日常观察细胞形态与贴壁情况,定期更换培养液,清除代谢废物;当细胞生长至合适密度时进行传代,使用消化试剂分离细胞,分装至新培养瓶;钙离子浓度调控可诱导细胞分化,按需调整培养基钙离子水平,构建不同分化阶段的细胞模型。
3.细胞保存方式。短期培养的细胞置于37℃、5%二氧化碳的恒温培养环境;长期保存采用梯度降温冻存,加入冻存液后放入液氮环境储存;复苏操作动作需要快速,减少低温保护剂对细胞的损伤。
4.培养注意事项。严格执行无菌操作,防止真菌、细菌污染;避免细胞过度长满,高密度会加速细胞分化,降低后续实验可用性;尽量减少细胞传代次数,多次传代会改变细胞原有生物学特性;操作时避免反复吹打造成细胞机械损伤。
NHEK人表皮角质形成细胞作为体外皮肤研究的常用细胞模型,能够在细胞层面模拟人体表皮的生理反应。规范开展细胞复苏、传代与保藏工作,控制培养环境,减少污染与细胞状态异常,能够稳定获取合格的实验细胞,支撑皮肤相关课题的研究工作,助力外用产品、皮肤疾病相关的科研探索。