一、台盼蓝染色计数法(基础常规法)
原理
细胞膜完整的活细胞可阻挡台盼蓝进入胞内，细胞无色；凋亡、坏死细胞细胞膜破损，染料渗入胞质被染成蓝色，通过计数区分活死细胞，计算细胞活率。
操作流程
消化收集人源细胞，制备单细胞悬液；
细胞悬液与 0.4% 台盼蓝溶液按 1:1 混匀；
滴加至血细胞计数板，显微镜下分别统计活细胞、死细胞数量；
计算公式：细胞活力 = 活细胞总数 ÷(活细胞 + 死细胞)×100%。
优缺点
操作简单、成本低，实验室日常传代、冻存前用；仅能瞬时检测，无法定量细胞增殖活性，灵敏度偏低。
二、CCK-8 检测法(高通量定量选择)
原理
CCK-8 试剂含水溶性四唑盐，仅能被活细胞线粒体内脱氢酶还原，生成橙黄色可溶性甲瓒产物，产物吸光度与活细胞数量呈线性相关，酶标仪测 450nm 吸光值反映细胞活力。
适用场景
人源肿瘤细胞、正常组织细胞药物毒性、增殖、抑制实验高通量筛选。
优势
毒性低，无需裂解细胞，可同一块 96 孔板连续检测；灵敏度远高于 MTT，重复性好。
三、MTT 比色法
原理
MTT 被活细胞线粒体还原为不溶于水的蓝紫色甲瓒结晶，需加入 DMSO 溶解结晶，检测吸光度定量活细胞数量。
优缺点
试剂价格低廉；缺点是甲瓒不溶，操作多一步溶解步骤，DMSO 有细胞毒性，检测后细胞无法继续培养。
四、LDH 乳酸脱氢酶释放法(检测细胞损伤坏死)
原理
LDH 稳定存在于细胞胞质，活细胞几乎不释放；细胞受损裂解后 LDH 释放至培养基，通过酶促显色反应测上清 LDH 含量，间接判定细胞损伤程度、细胞活力。
特点
不破坏细胞，取上清即可检测，多用于人源细胞氧化损伤、药物溶毒、补体杀伤实验。
五、ATP 荧光检测法(高灵敏快速检测)
原理
活细胞内 ATP 含量稳定，坏死细胞 ATP 快速降解；荧光素 - 荧光素酶体系与 ATP 反应产生荧光，荧光强度正比于活细胞 ATP 总量，快速定量细胞活力。
优势
检测速度极快，灵敏度极高，适合微量人源细胞、3D 细胞球活力检测。
六、流式细胞术双染法(精准区分活 / 凋亡 / 坏死细胞)
常用组合：Annexin V-FITC + PI 双染
Annexin V 结合凋亡细胞膜外翻磷脂酰丝氨酸，标记早期凋亡细胞；
PI 无法穿透完整活细胞膜，仅染晚期坏死、破损细胞；
优势
可同时区分活细胞、早期凋亡、晚期坏死三类细胞，数据精准，适合细胞凋亡机制研究、原代人源细胞检测。
七、Calcein-AM/PI 活死细胞荧光染色(荧光成像观察)
原理
Calcein-AM 无荧光，穿透活细胞后被酯酶水解生成带绿色荧光的 Calcein；PI 红色荧光标记破损死细胞，荧光显微镜直接成像观察细胞存活状态。
适用
人源原代细胞、共培养细胞、细胞爬片形态可视化活力观察。
各类方法选用建议
细胞传代、冻存质控：台盼蓝染色；
药物筛选、增殖定量：CCK-8；
细胞损伤、毒性释放：LDH 释放实验；
凋亡分层定量：流式 Annexin V/PI 双染；
荧光镜下直观观察：Calcein-AM 活死双荧光染色。
更新时间：2026-08-28
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