技术文章
Technical articles 摘要
骨关节炎模型,动物模型,构建动物模型实验,动物造模,大鼠模型,模型大鼠
骨关节炎(osteoarthritis, OA)是一种关节慢性退行性疾病,主要临床症状为关节疼痛、僵硬、畸形和功能障碍。
OA通常发生于老年人,研究表明超过一半的65岁以上老年人都有症状性或影像学上的OAP。OA会导致患者肢体残疾和生活质量严重下降,其主要治疗方式包括减少关节负重、药物治疗、物理治疗和手术治疗。
二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)是一种n-3多不饱和脂肪酸,与二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA)相同,不饱和双键起始于甲基端的第3个碳原子上。DHA和EPA的天然来源主要是海洋动物,如贝类、甲壳类、鱼类,特别是鳍、鲑、鲱、沙丁鱼等,是饮食中重要的营养物质。
研究发现,DHA对多个系统具有广泛而明确的抗炎作用,并应用于包括心血管疾病、炎症性肠病、肥胖、糖尿病、非酒精性脂肪肝等多种炎症性疾病的实验动物模型和临床试验中。但目前DHA对OA炎症反应的抑制活性及其对关节软骨的保护能力尚不清楚。
本研究在体外实验中,利用大鼠OA模型测定DHA对OA关节软骨的影响,并测定细胞凋亡、自噬及炎症相关蛋白的表达,以了解DHA对OA关节软骨的影响及机制。
目的
研究二十二碳六烯酸(DHA)对大鼠骨关节炎(OA)关节软骨组织退变的影响,并初步探讨其机制。
方法
手术切除内侧半月板、切断前交叉韧带构建大鼠OA动物模型,并采用富含DHA的饲料喂养;同时采用假手术或正常饲料喂养进行对照。HE染色、甲苯胺蓝染色、番红O-固绿染色观察关节软骨组织退变程度,采用改良Mankin评分评价番红O-固绿染色标本关节软骨组织损伤;采用免疫组织化学染色法检测关节软骨组织中Ⅱ型胶原的表达;采用蛋白印迹法检测关节软骨组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)、Beclin-1及通路蛋白磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(p-JNK)、磷酸化p38蛋白(p-p38)的表达;microCT观察软骨下骨的结构变化。
结果
口服DHA减轻OA大鼠关节软骨退变程度,并显著降低Mankin评分;免疫组织化学染色结果显示DHA可提高软骨细胞Ⅱ型胶原阳性表达率;蛋白印迹法检测结果显示DHA可减少关节软骨组织中mTOR和MMP-13的表达,并增加Beclin-1的表达;microCT显示DHA可改善骨小梁微细结构,减少软骨下骨囊变及硬化;通路蛋白检测显示DHA可显著抑制p-p38的表达。
结论
DHA可有效减轻OA大鼠关节软骨退变及损伤,并改善软骨下骨微细结构。这一作用通过增加软骨细胞Ⅱ型胶原和Beclin-1的表达,并降低mTOR和MMP-13的表达而实现。DHA的作用机制为抑制p38通路。